货号: | GBY-5 |
保质期: | 1年 |
保存条件: | -20度 |
供应商: | 金博益 |
品名:SYBR GreenⅠ
品牌:金博益
浓度:20×500ul in DMSO
货号:GBY-5
保存:-20℃
1.SYBR Green I荧光定量PCR简介和原理
SYBR Green I与dsDNA 结合荧光信号可增强800—1000倍。在PCR反应体系中,加入过量SYBR Green I荧光染料,SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后,荧光信号增强,而不掺入链中的SYBR Green I染料分子荧光不变,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。荧光可以在退火阶段或者延伸阶段测定。
2.使用方法:
我们提供的为20×的浓缩液,使用时可稀释20—100倍,使反应的终浓度为1×到0.2×之间。例如配50ul总体积的PCR反应液,应加20×的SYBR Green I染料0.5ul—2.5ul。
3.使用浓度对荧光PCR结果的影响
SYBR Green I荧光定量PCR的试验成功有很多因素,但是SYBR Green I的使用浓度是非常关键的因素 ,如果SYBR Green I的浓度过低会使荧光信号的变化降低。这就意味着低拷贝的样品可能无法检出;而在高浓度时,将会抑制PCR反应。降低PCR反应效率。所以一般在使用SYBR Green I时应根据实际情况优化使用浓度。
4.镁离子浓度的影响
提高镁离子浓度可以降低SYBR Green I对PCR反应的抑制作用。我们建议在用SYBR Green I进行荧光PCR反应时,镁离子浓度要比无SYBR Green I 的普通 PCR 反应要高出 0.5 至3mM。