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提供者：15453849321 发布时间：2018/10/15 阅读次数：126次
His作为蛋白纯化时的首选标签，其优势在于：1.N-端的His与细菌的转录翻译机制兼容，有利于蛋白表达；2.His对目的蛋白本身特性几乎没有影响，不会改变目的蛋白本身的可溶性和生物学功能；3.His非常小，在融合蛋白结晶后对蛋白的结构没有影响；His的免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射入动物体内进行免疫并制备抗体；
纯化His融合蛋白目前通用做法是用镍柱亲和纯化，但用镍柱纯化会有蛋白不溶解，蛋白不挂柱、蛋白难洗脱、电泳杂带多、特异性差、金属镍离子容易脱落漏出混入蛋白溶液，不但会通过氧化破坏目的蛋白的氨基酸侧链，而且柱子也会非特异吸附蛋白质等问题。
本公司提供的加拿大ImmuneChem品牌His-tag Antibody, Agarose与镍柱相比其优势在于：
使用His-tag Antibody, Agarose（货号ICP1310）纯化富集His-Tag蛋白WB效果。
使用方法、步骤：
1. 取Anti-His Agarose 100uL装柱，用0.5ml 0.05mol/mL M HCl洗填料，再PBSt洗至中性；
2. 取His-Tag重组细菌裂解液离心取上清，用蒸馏水稀释5倍，上柱；
3. 依次用3mL PBSt，3mL蒸馏水洗填料，再300uL 0.05mol/mL HCl in PBSt溶液洗脱，收集300uL洗脱液，10uL饱和碳酸钠中和，待测。
4. 洗脱液用ELISA法检测；
5. 洗脱液用WB法检测：取同体积的His-Tag重组细菌裂解液、His-Tag重组细菌裂解液滤过液及洗脱液各加入1/4的5*loading buffer，煮沸5分钟，离心上样电泳进行WB检测
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