进行在体或离体器官及组织实验时,应尽可能使标本处于近似在体内的环境以保证其正常的生命及其功能活动。其需要具备以下条件:
(1)渗透压与组织液相同;
(2)有维持组织器官正常机能所必需的比例适宜的各种离子;
(3)酸碱度与血浆相同并具有缓冲能力;
(4)营养物质、氧及温度与组织液相同。这类液体称为生理盐溶液。
一、常用生理盐溶液的配制
动物种类不同其代替液的组成各异,渗透压也不一样,因此,作为代替液的生理盐溶液在组成成分上也有所区别。如:两栖类动物体液的渗透压相当于0.65%NaCI溶液;温血动物体液的渗透压则相当于0.9%NaCI溶液;海生动物体液的渗透压约相当于3%NaCI溶液。
不同动物的组织器官对氧和营养物质等内环境成分的需求有一定差异。两栖类动物组织器官对氧和营养物质需要程度低于温血动物。各种实验的目的不同生理盐溶液的组成成分可作种种变动。常用的有:生理盐水、任氏液、乐氏液、台氏液等。
(一) 常用生理盐溶液及其成分
(二)利用原液配制生理盐溶液
二、常用生理盐溶液的用途
一般实验中常用的盐溶液有生理盐水即与血清等渗氯化钠溶液,在冷血动物应用0.6%~0.65%,哺乳动物应用0.85%~0.9%。任氏液(Ringer)主要用于蛙心灌注及其他冷血动物实验;乐氏液(Locke)用于哺乳类动物心脏、子宫及其离体脏器实验,灌注时须于用前通入氧气15min。低钙乐氏液(含无水CaCl20.05g)用于离体小肠及豚鼠的离体支气管灌注。台氏液(Tyrode)用于哺乳动物离体小肠实验。
近年来对组织提取和细胞培养常需用胰蛋白酶(trypsin)或EDTA(ethylene diamine tetraacetic acid, Versene)对组织或细胞进行处理。Ca2+或Mg2+对此有妨碍作用,故在此情况,常用不含Ca2+及Mg2+的生理盐溶液。用胰蛋白酶处理的组织或细胞,常用溶液作为营养液。Moscona溶液成分为:
NaCl 8.00 g
KCl 0.20 g
NaH2PO4 0.005 g
NaHCO3 1.00 g
Glucose 2.00 g
加蒸馏水到 1000 ml
需用处理的组织或细胞,所用营养的成分则为:
Na-Versenate 0.2 g
NaCl 8.0 g
KCl 0.2 g
Na2HPO4 1.15 g
KH2PO4 0.2 g
Glucose 0.2 g
加蒸馏水到 1000 ml
三、生理盐溶液配制注意事项
配制生理盐溶液时要注意各种离子的相互作用。一般应在实验前配制,并不宜放置过久,以免发生污染或某些成分发生化学变化而影响实验结果,或者先将溶液的各种成分分别配制成一定浓度的基础溶液备用,用时按比例取基础液配制。在配制各种生理盐溶液时应注意以下几点:
1. 因生理盐溶液中的磷酸根和碳酸根负离子易与钙离子发生反应,生成不溶性的白色磷酸钙或碳酸钙沉淀。所以,在配制生理盐溶液时,先将其他离子原液混合并加入蒸馏水,最后再将溶解的氯化钙溶液一边搅拌一边缓缓加入,以防钙盐沉淀生成。
2. 葡萄糖应在临用时加入,加入葡萄糖的生理盐溶液不能久置,以免发生细菌污染出现混浊。