所有分类
提供者：15453841052 发布时间：2018/09/06 阅读次数：143次
本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆
试验原理：
人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)试剂盒是夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的浓度呈比例关系。
试剂盒内容及其配制
| 试剂盒成份（2-8℃保存） | 96孔配置 | 48孔配置 | 配制 |
| 96/48人份酶标板 | 1块板（96T） | 半块板（48T） | 即用型 |
| 塑料膜板盖 | 1块 | 半块 | 即用型 |
| 标准品：480μg/L | 1瓶（0.6ml） | 1瓶（0.3ml） | 按说明书进行稀稀 |
| 空白对照 | 1瓶（1.0ml） | 1瓶（0.5ml） | 即用型 |
| 标准品稀释缓冲液 | 1瓶（6ml） | 1瓶（3.0ml） | 即用型 |
| 生物素标记的抗IGF-1抗体 | 1瓶（6ml） | 1瓶（3.0ml） | 即用型 |
| 亲和链酶素-HRP | 1瓶（6ml） | 1瓶（3.0ml） | 即用型 |
| 洗涤缓冲液 | 1瓶（20ml） | 1瓶（20ml） | 按说明书进行稀释 |
| 底物A | 1瓶（6.0ml） | 1瓶（3.0ml） | 即用型 |
| 底物B | 1瓶（6.0ml） | 1瓶（3.0ml） | 即用型 |
| 终止液 | 1瓶（6.0ml） | 1瓶（3.0ml） | 即用型 |
| 标本稀释液 | 1瓶（6.0ml） | 1瓶（3.0ml） | 即用型 |
自备材料
1．蒸馏水。
2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3．振荡器及磁力搅拌器等。
安全性
1．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项
1．试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9．按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
样品收集、处理及保存方法
1、血清－－－－-操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2、血浆－－－－-EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、细胞上清液－－-1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、组织匀浆－－－－-将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液
5、保存－－－－－－如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
试剂的准备
1．标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：
| 240μg/L | （5号标准品） | 150ul的原倍标准品加入150ul的标准品稀释液 |
| 120μg/L | （4号标准品） | 150ul的5号标准品加入150ul的标准品稀释液 |
| 60μg/L | （3号标准品） | 150ul的4号标准品加入150ul的标准品稀释液 |
| 30μg/L | （2号标准品） | 150ul的3号标准品加入150ul的标准品稀释液 |
| 15μg/L | （1号标准品） | 150ul的2号标准品加入150ul的标准品稀释液 |
| 0μg/L | （空白对照） | 原始浓度不用稀释直接加入50ul。 |
2．洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。
操作步骤
1．使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2．根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
3．加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5．每孔加入50ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7．每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8．取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9．在450nm波长处测定各孔的OD值。
建议使用的实验方案
| 标准品浓度（μg/L） | ||||||||||||
| A | 240 | 240 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 |
| B | 120 | 120 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 |
| C | 60 | 60 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 |
| D | 30 | 30 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 |
| E | 15 | 15 | 样品 | 样
关键词： 人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)ELISA试剂盒说明书
| ||||||||
