取自C57BL/6孕鼠(见栓后3.5天)囊胚内细胞团。在饲养层细胞(γ射线照射的小鼠胚胎成纤维细胞)上，用C57BL/6小鼠胚胎干细胞完全培养基(货号：MUBES-90011)进行培养。传代扩增至第二代冻存，每支含1×106个细胞。
细胞特性：
细胞增殖能力良好。
碱性磷酸酶染色阳性。
表达OCT-4、SSEA-1及nanog。
核型正常（40,XY或40,XX），长时间培养仍保持正常核型。
在免疫缺陷小鼠体内可形成畸胎瘤。
具有多向分化的能力，可分化为包括神经元等在内的三胚层的细胞。
产品介绍
胚胎干细胞（ESCs）是来源于囊胚内细胞团的全能干细胞。具有向外胚层、内
胚层、中胚层分化的能力，可以分化成各种类型细胞。不同于其他干细胞，胚胎干细
胞具有无限增殖能力。胚胎干细胞的可塑性和无限增殖的能力，使其成为再生医学和
组织工程研究的热点。
Cyagen C57BL/6 小鼠胚胎干细胞在体外扩增培养后仍维持正常二倍体，表达胚
胎干细胞的特殊标记物，在体外培养能形成拟胚体（EB），体内实验可以形成畸胎
瘤。
Cyagen C57BL/6 小鼠胚胎干细胞来源于C57BL/6小鼠3.5天囊胚期的内细胞团，
使用 的小鼠胚胎干细胞培养基并在经γ-射线处理的MEF（小鼠胚胎成纤维细
胞）上培养。
质量控制：
本产品经过了细菌/真菌、支原体、内毒素检测。
本产品还经过细胞复苏活力检测、细胞周期、传代能力、分化潜能
鉴定。
该产品仅提供给进一步科研使用，不可应用于临床治疗等其他方面
质量控制：
本产品经过了细菌、真菌、支原体检测。
运输保存：
采用干冰保存运输。
收到细胞时，若干冰已经完全融化，请立即将细胞复苏培养；若尚留有干冰，请立即将细胞放入液氮中保存待用，请按指定条件贮存细胞，切不可将细胞置于高温环境。
产品承诺：
建议使用本公司配套的培养基和正确的培养方法来解冻、传代，以此保证细胞具备良好的增殖和分化能力。
使用：
本产品只提供给进一步的科研使用，不可应用于临床。
在特定条件下能无限增殖。
表达Oct4、SSEA-1 和Nanog (≥ 90%)，不表达 SSEA-3和SSEA-4 (≤ 5%)。 产品应用领域
C57BL/6 小鼠胚胎干细胞是很多领域的基础和应用研究的强有力工具，包括发育
和调控研究、再生生物学、潜在治疗方法。此外对胚胎干细胞进行基因修饰并将其引
入到小鼠生殖系中是获得基因修饰小鼠的一个非常有效的方法。 处理原则
1. 要在无菌的条件下处理该产品。
2. 如果使用饲养层细胞进行培养，建议使用Cyagen ICR小鼠胚胎成纤维细胞
（已灭活）（货号： MUIEF-01002）。
3. 如果使用无血清无饲养层的培养条件，建议使用Cyagen 小鼠胚胎干细胞
无血清培养基（货号：MUXES-90061）。
4. 传代培养过程，建议的接种密度是（1.0~2.0）×10
4 cells/cm2，具体数量请根据细
胞状态加以调整.。
注意: 我们强烈建议使用培养基和其他相关试剂以达到最理想的培养效果。 培养瓶/皿包被 0.1%明胶
所需材料
明胶溶液（货号：GLT-11301）
为了使γ射线照射处理的第一代小鼠胚胎成纤维细胞更有效地贴附于培养器皿，
要对培养器皿的表面进行明胶包被。
操作：
1. 加适量0.1%明胶到培养瓶/皿中，能覆盖整个培养瓶/皿底面即可。
2. 摇匀液体使其覆盖整个培养瓶/皿的底面。
3. 将铺有0.1%明胶的培养瓶/皿放置在超净台至少30 min。
4. 30 min后，弃去明胶，待培养瓶/皿晾干后，即可用于接种细胞。
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注意: 包被明胶的培养瓶/皿在无菌和明胶不蒸干的条件下，可以在4°C保存两周。
ICR 小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）的复苏
所需材料
ICR小鼠胚胎成纤维细胞 （货号： MUIEF-01002）
ICR小鼠胚胎成纤维细胞完全培养基（货号：MUXEF-90011）
MEF细胞的复苏
1. 水浴锅37°C预热。
2. 准备好ICR小鼠胚胎成纤维细胞完全培养基，温浴到37°C。
3. 取一个15 mL离心管中加入9 mL ICR小鼠胚胎成纤维细胞完全培养基。
4. 从液氮罐中取出一管MEF细胞，立即放入-80°C冰箱（目的是让进入冻存管的液
氮挥发）。
5. 在-80°C放置2~3 min后，取出MEF，迅速放入37°C水浴锅中快速晃动，仔细观察，
直至冻存液完全融化。
注意：
1 尽可能避免水没过管帽，以减少污染的风险。
2 要快速完成细胞复苏过程，融化过程时间过长，会造成复苏后的细胞活性较差。
6. 用70%~75%酒精擦拭消毒冻存管口的外表面。
7. 在超净台中打开冻存管，用吸管将细胞冻存悬液转移至装有9 mL 胚胎成纤维细胞
完全培养基的离心管中。
8. 用1 mL培养基再次冲洗冻存管，减少细胞的损失。
9. 将细胞悬液经250 ×g（对应于Eppendorf 5810R离心机是1134 rpm）离心5 min后，
尽量去除上清液。
10. 加入1 mL的胚胎成纤维细胞完全培养基，轻轻吹打混匀细胞沉淀。
11. 将细胞按2.5×10
4个活细胞/cm2的密度接种到培养器皿中，加入足量的胚胎成纤维
细胞完全培养基，轻轻摇晃细胞培养器皿使细胞均匀分布。
12. 放入37°C、5% CO2、饱和湿度的培养箱中培养。
13. 复苏后的第2天，给复苏的细胞换用新鲜的小鼠胚胎成纤维细胞完全培养基（已
预热到37°C）。
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注意:
1 胚胎干细胞复苏前一天复苏MEF细胞。
2 如果MEF细胞换液当天将复苏小鼠胚胎干细胞，可以直接更换成小鼠胚胎干
细胞培养基。
3 复苏后的MEF应在5天内使用。
图1 生长在0.1%明胶包被培养瓶/皿上的Cyagen MEF (已灭活)
C57BL/6 小鼠胚胎干细胞的复苏
所需材料
C57BL/6 小鼠胚胎干细胞 （货号：MUBES-01001）
C57BL/6小鼠胚胎干细胞完全培养基 （货号： MUBES-90011）
复苏小鼠胚胎干细胞
1. 水浴锅37°C预热。
2. 准备好C57BL/6小鼠胚胎干细胞完全培养基，温浴到37°C。
3. 在15 mL 离心管中加入 9 mL胚胎干细胞完全培养基。
4. 从液氮罐中取出冻存的小鼠胚胎干细胞，立即放入-80°C冰箱（目的是让进入冻存
管的液氮挥发）。
5. 在-80°C放置2~3 min后，取出冻存细胞，将冻存管迅速放入37°C温水中，快速晃
动使管中内含物尽快融化。仔细观察，待冻存管内含物完全融化后取出。
注意:
1 尽可能避免水没过管帽，以减少污染的风险。
2 要快速完成细胞复苏过程，融化过程时间过长，会造成复苏后的细胞活性较差。
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6. 用70%~75%酒精擦拭消毒冻存管口的外表面。
7. 在超净台中打开冻存管，将细胞冻存悬液转移至装有完全培养基的离心管中。注
意尽量避免产生气泡。
8. 为了减少细胞损失，再往冻存管中加入1 mL完全培养基，稍微吹打，收集至离心
管中。
9. 将细胞悬液经250 ×g（对应于Eppendorf 5810R离心机是1134 rpm）离心5 min。
10. 离心期间，给提前准备的MEF换用小鼠胚胎干细胞完全培养基（已预热至37°C）。
注意：
1) 换液时，吸去 MEF 的培养液之后，建议用 PBS 洗涤 1~2 次之后再加入小鼠胚胎
干细胞的完全培养基。
2) 建议换液的体积为：T25培养瓶加入约5 mL；T75培养瓶加入约15 mL；六孔板加
入约2 mL。
11. 离心后尽量去除上清液，加入1~2 mL的完全培养基（已预热至37°C），轻轻吹打
混匀、细胞沉淀。
12. 将小鼠胚胎干细胞按（1.0~2.0）×10
4个活细胞/cm2的密度接种到已换好液的铺有
MEF的培养器皿中。轻轻摇晃细胞培养器皿，使细胞均匀分布。
13. 放入37°C、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养；
14. 复苏之后的第二天，给复苏的细胞换用新鲜的小鼠胚胎干细胞完全培养基（已预
热至37°C）。
注意：为避免反复温热培养基，如果在一次操作中无法用完整瓶培养基，建议分装到适
当的无菌容器中。换液时只取当天所需用量的培养基进行预热。
15. 之后，每24 h给细胞更换新鲜的小鼠胚胎干细胞完全培养基（已预热至37°C）。
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图2 培养在Cyagen MEF（已灭活）上的C57BL/6小鼠胚胎干细胞（P21）
