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提供者：15453838811 发布时间：2018/12/11 阅读次数：53次
非洲猪瘟病毒DNA/RNA核酸提取试剂盒（A盒）
【产品名称】：非洲猪瘟病毒DNA/RNA核酸提取试剂盒
【包装规格】：25T/盒&50T/盒
【预期用途】
本产品适合于从血清、血浆、牛奶、体液、培养液、组织匀浆液、拭子等样品中提取病毒RNA或DNA。试剂盒基于硅胶柱纯化技术，提取过程中无需使用有毒的酚氯仿抽提，也无需进行耗时的醇类沉淀。获得的DNA/RNA可直接用于RT-PCR、PCR、Northern杂交、以及各种病毒检测等。
【主要组成成份】
| 组成 | 25T/盒 | 50T/盒 |
| 纯化柱 | 25个 | 50个 |
| 2ml收集管 | 25个 | 50个 |
| 蛋白酶K（B盒） | 600µl | 1.2ml |
| 裂解液（Buffer AL） | 10ml | 20 ml |
| 洗涤液（Buffer RW） | 50ml | 100ml |
| Nuclease Free Water | 5ml | 10 ml |
【储存条件及有效期】
本产品部分组份（不含蛋白酶K）保存于室温(15-25℃)，有效期12个月，长期保存时需置于2-8℃；蛋白酶K保存于-20℃，有效期12个月。
【注意事项】
1、自备无水乙醇(96-100%)、自备离心管;
2、为避免其他核酸的污染，必须使用不含DNA和RNA的离心管、吸管、枪头、试剂和手套，操作人员须戴口罩;
3、避免反复冻融蛋白酶K，会影响其活性。
【操作步骤】
1.转移20µl蛋白酶K至1.5ml离心管中。
2.转移200 µl样品,如血清、血浆、尿液、培养液上清、或其它无细胞体液至装有蛋白酶K的离心管中,震荡混匀5s。若样品不足200µl，用Buffer PBS或无核酶水补足。（咽/口腔拭子，或固体组织样品先用Buffer PBS浸泡或匀浆后,离心取上清进行操作。）
3.加入200µl裂解液至步骤2的混合液中,涡旋混匀15s,室温静置10min。
4.加入250µl无水乙醇至步骤3的混合液中,涡旋混匀15s,室温静置3min。
5.把纯化柱装在2ml收集管中，转移步骤4的混合液至纯化柱中。12,000rpm离心1min。
6.倒弃滤液把纯化柱装回收集管中,加入650 µl洗涤液至纯化柱中,12,000rpm离心1min。
7.按照步骤6重复一次。
8.倒弃滤液把纯化柱套回收集管,12,000rpm离心空柱2min甩干纯化柱。
9.将纯化柱转移至新的1.5ml离心管,加入50µlNuclease Free Water至纯化柱的膜中央，室温静置1min，12,000rpm离心1min。离心管中即为所提取的样品DNA/RNA。
非洲猪瘟病毒DNA/RNA核酸提取试剂盒【常见问题】
1.纯化柱堵塞
l样品用量太多：处理动物抗凝血液时，样品量控制在100-150µl。尽量使用无细胞的样品，如血浆、血清、组织匀浆液的上清等。
l蛋白酶K活性下降：重新制备蛋白酶 K。使用后蛋白酶 K必须保存于-20℃，避免反复冻融。蛋白酶 K与裂解液不能预先混合。
l样品含固体颗粒：在第4步加入乙醇前，12,000rpm离心3min去除未消化的杂质，转移上清液至新的离心管后再加入乙醇。
l样品裂解不充分：样品与裂解液混匀不充分。重新提取，加入裂解液后先颠倒混匀3-5次，然后以最高速度涡旋让样品与裂解液充分混匀。
2.下游应用结果不理想
l样品被反复解冻：避免反复冻溶样品。推荐使用新鲜样品或只解冻过一次的样品。
l蛋白酶K活性下降：更换蛋白酶K。使用后蛋白酶 K必须立即保存于-20℃，避免反复冻融。
lNuclease Free Water被污染：更换新的Nuclease Free Water或DEPC处理水。
l乙醇残留：柱子在洗脱前，需要空甩去除乙醇。对于敏感的应用，柱子在洗脱后，打开柱子的盖子，放置10-15min让乙醇彻底挥发。
l洗脱效率：处理富含DNA的样品时，把Nuclease Free Water预热至55℃后再进行洗脱，有利于提高DNA得率。
非洲猪瘟病毒DNA/RNA核酸提取试剂盒
